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熒光定量PCR實驗時的好方法

更新時間:2020-07-18      點擊次數:2109

實時熒光定量PCR技術實現了PCR從定性到定量的飛躍,具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,成為核酸分子定量的標準方法。在做熒光定量PCR實驗時建議使用這些耗材:96孔光學反應板配合光學膜,0.2ml光學八聯反應管配合光學膜,0.2ml光學八聯反應管配合平蓋的光學八聯管蓋等。在做熒光定量PCR實驗時有一些好的方法分享給大家,例如在使用單管或者8連管做實驗時,如果在樣本數量不多的時候,建議在樣品加熱塊(TRAY)上對稱的安放樣品,并且先放在第6列或者第7列,然后逐漸向兩邊放置。這樣熱蓋壓下來的時候不至于發生傾斜,每個反應管的受力和受熱都比較均勻,提高了孔與孔之間的數據精密性。又例如使用96孔板做實驗的時候,建議使用光學膜代替蓋子來密封反應孔。封膜的方法要先沿著96孔板的縱向壓膜,然后在橫向,后在沿著板的邊緣按壓密封。Pilot5-8T凍干機應用示例(熒光PCR凍干):

  1. 探針、底物、引物原料要求確定。
  2. 凍干溶液配方開發,采用正交法或響應曲面法進行輔料篩選。
  3. 選擇適合的包材和模具。
  4. 設計凍干曲線配合輔料篩選。
  5. 確定配方及工藝。
  6. 穩定性測試。
  7. 根據穩定性測試結果修正工藝或配方。
  8. 整個環節注意環境、設備、人員的結合。

 

型號

Pilot3-6T

Pilot5-8T

Pilot7-12T

Pilot10-15T

凍干面積

0.42

0.56

0.84

1.05

22西林瓶裝量(20ML

≥900

≥1170

≥1500

≥2100

16西林瓶裝量(5ML

≥1700

≥2210

≥3100

≥4100

冷阱溫度(空載)

-85

真空度(空載)

≤1Pa

板層溫度(空載)

-55

板層制冷方式

硅油循環

板層數量

3+1

4+1

4+1

5+1

板層尺寸(mm

350*400

350*400

350*600

350*600

捕水能力

6L

8L

12L

10L

凍干效率

3L/24H

5L/24H

7L/24H

10L/24H

板層間距

100mm

80mm

90mm

100mm

穿墻隔離

凍干曲線擬合度

100%

100%

100%

100%

晶型控制

蒸汽分壓控制

升華結束判定

凍干終點測試

壓塞

液壓

整機尺寸 (約)

W860*D1400*H1800

W860*D1400*H1800

W860*D1700*H1900

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